Diferencia entre revisiones de «Inmunofluorescencia»

 

 

 

La '''inmunofluorescencia''' es una técnica de inmunomarcación que hace uso de [[anticuerpo]]s unidos químicamente a una sustancia fluorescente para demostrar la presencia de una determinada molécula. Es una técnica que tiene variantes cuali y cuantitativas, por ejemplo [[Inmunoensayo por detección de fluorescencia polarizada|FPIA]] dentro de las cuantitativas y la inmunotinción de células para su observación por microscopía fluorescente dentro de las cualitativas.

 

La inmunofluorescencia, como todos los [[inmunoensayo]]s, aprovecha la capacidad que tienen los anticuerpos para unirse con alta especificidad a una determinada molécula blanco; pero se diferencia de otras técnicas [[inmunoquímica]]s en que aquí la marca unida al anticuerpo es una molécula fluorescente tal como por ejemplo, el [[isotiocianato de fluoresceína]]. El anticuerpo marcado se hace reaccionar contra un preparado biológico y luego se expone la muestra asi tratada a una fuente de luz de onda corta (ultravioleta o azul) seleccionada por medio de un [[monocromador]]. Esta luz de onda corta genera un fenómeno de [[fluorescencia]] en la molécula marcadora que a su vez emite luz a una longitud de onda mas larga (verde, amarillo o naranja). Esta luz emitida puede ser cuantificada con facilidad por [[fotometría]] o en el caso de tratarse de preparados histológicos, puede ser observada por medio de un [[microscopio de fluorescencia]].

En el caso de la utilización de la inmunofluorescencia como método de tinción para microscopía óptica, el fluorescente revela la localización a nivel celular o subcelular de la molécula diana.

La inmunofluorescencia como técnica inmunoquímica de cuantificación se puede utilizar tanto en muestras de origen biológico como en muestras no biológicas, siempre que se encuentren en un medio favorable para la unión de los anticuerpos. En general se utiliza una solución PBS ([[Buffer fosfato salino]]) como medio de reacción. Un ejemplo de este tipo de técnicas es la [[Inmunoensayo por detección de fluorescencia polarizada|FPIA]].

 

Existen dos tipos de técnicas de inmunofluorescencia; primaria (o directa) y secundaria (o indirecta).

 

 

Tipicamente se hace uso de diferents anticuerpos primarios con diferentes regiones constantes generados por la estimulación en la producción de anticuerpos en diferentes especies. Por ejemplo, un investigador puede estimular la producción de un determinado anticuerpo primario en una cabra, y luego emplear un anticuerpo de conejo que reconozca la región constante de los anticuerpos de cabra (anticuerpos de "conejo anti-cabra"). Y luego puede crear un segundo juego de anticuerpos en ratón que sean reconocidos por un tipo diferente de anticuerpos "burro anti-ratón". Esto permite reutilizar los anticuerpos marcados, que son muy dificiles de obtener, en múltiples experimentos.

 

== Limitaciones ==

Esta última opción, aunque puede parecer una alternativa muy elegante a la inmunofluorescencia, requiere que las células sean [[transfección|transfectadas]] con el gen de la GFP, y esto además de las grandes complicaciones técnicas, requiere que las células (u organismos) recombinantes obtenidos sean mantenidos en condiciones muy estrictas de seguridad biológica.

 

* '''Burtis CA, Ashwood ER, Burns DE, Sawyer BG'''.(2008). «''Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry''» Saunders (Elsevier) 6º ed. ISBN 978-0-7216-3865-2.

 

== Referencias ==

{{reflist|2}}

 

== Enlaces externos ==

* [http://www.johanneshjorth.se/SynD/ SynD - Automatic synapse and neurite detection in immuno-fluorescence images]

 

 

[[cs:Imunofluorescence]]

[[ru:Метод флуоресцирующих антител]]

[[uk:Реакція імунофлюоресценції]]