Diferencia entre revisiones de «Reacción en cadena de la polimerasa»

[[Archivo:PCR es.svg|thumb|300px|Esquema general de la PCR.]]
[[Archivo:Cycle range end-point PCR.jpg|thumb|300px|Grado de amplificación según el número de ciclos empleados. '''A''': gel de agarosa (1: ladder, 2: producto específico, 3: producto inespecífico); '''B''' concentración de ADN respecto del tiempo; '''C''' logaritmo de la concentración de ADN respecto del tiempo.]]
El proceso de PCR por lo general consiste en una serie de 20 a 35 cambios repetidos de temperatura llamados ciclos; cada ciclo suele consistir en 2-3 pasos a diferentes temperaturas. La PCR común se realiza con ciclos que tienen tres pasos de temperatura. Los pasos de ciclos a menudo están precedidos por un choque térmico (llamado "hold") a alta temperatura (> 90&nbsp;°C), y seguido por otro hold al final del proceso para la extensión de producto final o el breve almacenaje. Las temperaturas usadas y el tiempo aplicado en cada ciclo dependen de gran variedad de parámetros. Éstos incluyen la enzima usada para la síntesis de ADN, la concentración de iones divalentes y de los dNTP en la reacción, y la temperatura de unión de los cebadores, así como la longitud del ADN que se desea amplificar.<ref name=molecular_cloning />
 
Actualmente, casi todos los termocicladores te dan la opción de realizar la reacción de PCR con la llamada " tapa caliente". Es decir, que el sistema del termociclador aplicará calor a la parte de arriba del vial que contiene la mezcla de PCR. Al comienzo, los laboratorios que empezaron a usar los primeros aparatos que se comercializaron y que no incluían este sistema tenían que poner unas gotas de aceite dentro del vial. El objetivo de este procedimiento, al igual que el de la tapa caliente, es evitar la condensación de la muestra, ya que en el eppendorf se encuentran dos fases:líquido y gas. Al condensarse la muestra, perdemos volumen de la mezcla. Sin embargo, calentando la tapa o poniendo las gotas de aceite evitamos este proceso físico, conservando casi intacto el volumen de la muestra. <ref name=molecular_cloning />
 
=== Inicio ===
* Los componentes del tampón de reacción deberán ajustarse a las exigencias de nuestras enzimas.
* El termociclador, por supuesto, debe ser capaz de reproducir correctamente los ciclos de la PCR: para ello, diversas casas comerciales nos ofrecerán termocicladores elaborados con materiales que hagan más eficaces el desarrollo y el transcurso de las etapas, además de diversas facilidades de manejo. Dentro del laboratorio, su manejo, mantenimiento y ubicación será clave.
 
 
== Tipos de PCR ==