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Línea 19: En la práctica, con el fin de amplificar cualquier secuencia en un organismo vivo, la secuencia a clonar tiene que estar vinculada a un origen de replicación; que es una secuencia de ADN capaz de dirigir este proceso, además se necesitan otras características determinadas y una variedad de vectores de clonación. La clonación de cualquier secuencia de ADN incluye los siguientes pasos: [[Fragmentación genética\|Fragmentación]]: Inicialmente, el ADN de interés necesita ser fragmentado para ~~proporcionar~~proveer un segmento relevante de ADN de un buen tamaño. La preparación de los fragmentos para la clonación se obtiene usando la técnica del [[Reacción en cadena de la polimerasa\|PCR]], pero también puede hacerse por medio de la digestión con [[enzimas de restricción]] y a veces fraccionando mediante el uso de la [[electroforesis en gel]]. [[Ligación]]: Un procedimiento de ligación se emplea cuando el fragmento amplificado se inserta en un [[vector biológico\|vector]]. Dicho vector (que generalmente es circular) se convierte en una secuencia lineal utilizando enzimas de restricción, y es incubado con el fragmento de interés, bajo las condiciones apropiadas, con launa enzima llamada [[ADN ligasa]]. [[Transfección]]: Después de la ligación, el vector con el gen de interés se transfecta a una [[célula]]. Comúnmente se utiliza la [[electroporación]], aunque existe un gran número de técnicas alternativas. [[Selección]]: Las células transfectadas se cultivan. Como este procedimiento actualmente se considera de baja eficiencia, se deben identificar las colonias de células que han sido exitosamente transfectadas con el vector que contiene el gen deseado. Para ello existen vectores de clonación que incluyen marcadores de resistencia a los [[antibiótico]]s, con los que sólo las células que han sido transfectadas pueden crecer. Existen otros vectores que permiten la selección gracias a otros métodos. === Clonación celular ===

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