Diferencia entre revisiones de «Proteína»

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Para realizar el análisis in vitro de una proteína, esta debe ser separada de otros componentes celulares. Este proceso generalmente empieza con la [[lisis]] de la célula, en la cual se destruye la membrana celular y su contenido se libera formando una solución llamada [[Lisis|lisado crudo]]. La mezcla resultante puede ser purificada utilizando [[ultracentrifugación]], que separa los distintos componentes celulares en fracciones que contienen proteínas solubles; lípidos y proteínas de membrana; orgánulos celulares y [[ácidos nucléicos]]. La [[Precipitado|precipitación]] por un [[Precipitación salina|método]] que se basa en la utilización de elevadas concentraciones salinas puede concentrar las proteínas del lisado. Diversos tipos de [[cromatografía]] se usan para aislar la proteína o proteínas de interés basándose en propiedades como la masa molecular, carga neta o afinidad de unión. El nivel de purificación puede ser monitorizado empleando varios tipos de [[electroforesis en gel]] si se conocen la [[masa molecular]] y el [[punto isoeléctrico]] de la proteína estudiada, por [[espectroscopía]] si la proteína tiene características espectroscópicas distinguibles, o bien por ensayos de enzimas si la proteína tiene una actividad enzimática. Además, las proteínas pueden ser aisladas según su carga por medio de la técnica de [[isoelectroenfoque]].
 
Para las proteínas naturales, pueden ser necesarios varios pasos de purificación para obtener proteína suficientemente pura para su uso en laboratorios. Para simplificar este proceso se utiliza a menudo la [[ingeniería genética]] para añadir características químicas a la proteína que faciliten su purificación, sin alterar su estructura o función. Como ejemplo, se le puede unir al final de la proteína una ''etiqueta'' consistente en una secuencia de aminoácidos específica, a menudo una serie de residuos de [[histidina]]. Como rpuitoresultado, cuando el lisado se hace pasar por una columna de cromatografía que contenga [[níquel]] los residuos de histidina se unen al níquel y anclan la proteína a la columna mientras que los componentes no etiquetados del lisado pasan sin impedimento.
esultado, cuando el lisado se hace pasar por una columna de cromatografía que contenga [[níquel]] los residuos de histidina se unen al níquel y anclan la proteína a la columna mientras que los componentes no etiquetados del lisado pasan sin impedimento.
 
=== Localización celular ===